واکنش زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی (Real time PCR) ، که همچنین به عنوان واکنش زنجیره ای پلیمراز کمی (qPCR) شناخته می شود ، یک روش آزمایشگاهی زیست شناسی مولکولی مبتنی بر واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) است.  این آزمایش تکثیر یک مولکول DNA را هدف قرار می دهد در طول PCR (یعنی در زمان واقعی) ، نه در پایان آن ، مانند PCR معمولی. از PCR در زمان واقعی (Real time PCR) می توان به عنوان یک تست کمی و نیمه کمی استفاده کرد.

دو روش معمول برای تشخیص محصولات  در Real time PCR:

1. رنگهای فلورسنت غیر اختصاصی است که به هر DNA دو رشته ای می چسبد
2. پروب هایDNA اختصاصی توالی متشکل از الیگونوکلئوتیدها که با یک گزارشگر فلورسنت برچسب خورده اند ، تلاقی می کنند. ، که تنها پس از ترکیبی از کاوشگر با توالی مکمل آن اجازه تشخیص می دهد.

اصول اساسی

PCR در زمان واقعی (Real time PCR) در یک سیکل حرارتی با ظرفیت نورپردازی هر نمونه با یک پرتو نور حداقل یک طول موج مشخص و تشخیص فلورسانس ساطع شده توسط فلوروفور تحریک شده انجام می شود. سیکل حرارتی همچنین قادر به گرم کردن و سرما زدگی پشت هم نمونه ها است ، از این طریق از خواص فیزیکوشیمیایی اسیدهای نوکلئیک و DNA پلیمراز استفاده می کند.

روند PCR به طور کلی از یک سری تغییرات دما تشکیل شده است که 25-50 بار تکرار می شود. این چرخه ها به طور معمول از سه مرحله تشکیل شده اند: مرحله اول ، در حدود 95 درجه سانتیگراد ، اجازه می دهد تا زنجیره دوتایی اسید نوکلئیک جدا شود. مورد دوم ، در دمای حدود 50-60 درجه سانتیگراد ، اتصال آغازگرها با الگوی DNA را امکان پذیر می کند ؛ سومین ، در دمای 68-72 درجه سانتیگراد ، پلیمریزاسیون انجام شده توسط DNA پلیمراز را تسهیل می کند. به دلیل کوچک بودن قطعات ، مرحله آخر معمولاً در این نوع PCR حذف می شود زیرا آنزیم قادر است تعداد آنها را در طول تغییر بین مرحله تراز و مرحله دناتوراسیون افزایش دهد. بعلاوه ، در PCR چهار مرحله ای ، فلورسانس در طی مراحل کوتاه دمایی که در هر چرخه فقط چند ثانیه طول می کشد ، با دمای مثلا 80 درجه سانتیگراد ، اندازه گیری می شود تا سیگنال ناشی از وجود دایمرهای آغازگر کاهش یابد هنگامی که از یک رنگ غیر خاص استفاده می شود. دما و زمان بندی مورد استفاده برای هر چرخه به پارامترهای متنوعی بستگی دارد ، از جمله: آنزیم مورد استفاده در سنتز DNA ، غلظت یونهای دو ظرفیتی و دئوکسییریبونوکلئوتیدها (dNTPs) در واکنش و دمای پیوند آغازگرها.

منبع: https://www.geniranlab.ir

برای آگاهی از آخرین خبرها و فرصت های پژوهشی ما را در شبکه های اجتماعی دنبال نمایید:

:Website

https://medcert.ir

:Instagram & Telegram ID

caspianmedfuture@